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    可見分光光度計的原理及常見用途說明

    更新時間:2022-03-22 點擊次數:355
       可見分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。測量范圍一般包括波長范圍為380~780nm的可見光區和波長范圍為200~380nm的紫外光區。
      
      一、工作原理:
      分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,部分光線被吸收。樣品對光的選擇性吸收波長,以及相應的吸收系數是該樣品的物理常數。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可計算出供試品中該物質的含量。在可見光區,除某些物質對光有吸收外,很多物質本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。
      
      二、設備常見用途:
      可見分光光度計是在可見光區域內對物質做定性、定量分析。常見的用途有以下幾種:
     ?。?)比色法蛋白質定量
      比色法的測定原理是組成蛋白質的氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關,從而反應蛋白質濃度。
      
     ?。?)核酸的定量
      核酸的定量是分光光度計使用頻率最高的功能??梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應的系數。測試后的吸光值經過上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度。
      
     ?。?)OD600細菌細胞密度
      實驗室確定細菌生長密度和生長期,多根據經驗和目測推斷細菌的生長密度。在遇到要求較高的實驗,需要采用分光光度計準確測定細菌細胞密度。OD600是追蹤液體培養物中微生物生長的標準方法。

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